ama欧蒙医学诊断 待遇法血代表什么

来源： 作者：佚名 时间：2015-06-21 21:41:13 标签：欧蒙医学诊断

肝功能异常患者血清中自身抗体检测及意义_下载_找论文网
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&&&&&&&&&&&& 作者：杨滨， 陈静， 薛恒， 刘灿， 欧启水&
【关键词】& 肝炎,自身免疫性；,自身抗体；,荧光抗体技术炎
　　摘要:& 目的& 探讨肝病相关自身抗体在肝功能异常患者血清中的阳性率及其诊断价值。& 方法& 以生物薄片马赛克技术制备的Hep2细胞、猴肝、心肌、鼠肝、鼠肾、胃共6种组织细胞为抗原基质，间接免疫荧光法检测肝病相关自身抗体，根据荧光反应强弱判定结果。& 结果& 80例肝功异常患者（肝脏功能异常，ALT&50 U/L）自身抗体阳性率为11.25%，其中抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）及抗线粒体抗体（AMA）的阳性率分别为7.5%、5%和6.25%；女性患者自身抗体的检出率明显高于男性患者（P&0.05）；病毒性肝炎标志物阴性组自身抗体检出率明显高于阳性组（P&0.05）。& 结论& 高滴度自身抗体对自身免疫性肝病的诊断有一定的价值，肝功能异常的非病毒性肝炎病人适合进行肝病相关自身抗体的检测。
　　关键词:& 肝炎,自身免疫性； 自身抗体； 荧光抗体技术炎
　　自身免疫性肝脏疾病是一组病因与发病机理尚不完全清楚但与自身免疫相关的一组疾病，包括自身免疫性肝炎（AIH）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）和原发性硬化性胆管炎（PSC）[12]。实验室检测特别是相关自身抗体的检测对自身免疫性肝病的诊断具有重要意义。某些自身抗体由于缺乏疾病特异性，不仅见于自身免疫性疾病，也出现于10%～15%的病毒性肝炎或其他免疫介导的疾病当中[1]。为了探讨包括抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗肝肾微粒体Ⅰ型抗体（LKMⅠ）、抗线粒体抗体（AMA）等自身抗体在肝病患者中检出的阳性率和意义，笔者收集80例肝功能明显异常的各种肝病患者，检测其血清中上述几种自身抗体，报告如下。
　　1& 临床资料
　　1.1& 一般资料& 选择2005年2月～5月来福建医科大学附属第一医院就诊的80例肝功能明显异常的各种肝病患者，男性57例，女性23例，年龄（46±15.6）岁（20～75岁）。80例中，确诊为病毒性肝炎54例，包括乙肝48例、丙肝5例、甲肝1例；非甲丙戊肝炎3例，包括胆石症、酒精肝和肝豆状核变性各1例；其余23例为不明原因的肝功能异常者。同时收集30例健康体检者作为对照组，年龄（41±12.5）岁（22～61岁）。
　　1.2& 方法& 所有对象均于清晨空腹抽取静脉血2 mL，分离血清，以ELISA法做病毒性肝炎血清标志物检测，同时以间接免疫荧光法检测血清中的相关自身抗体，，包括ANA、SMA、LKMI及AMA。试剂来源为德国欧蒙免疫试剂公司生产的自身抗体试剂盒。血清检测时主要采用Hep2细胞、猴肝、鼠肝、鼠肾、心肌和胃组织冰冻切片作为抗原，采用生物薄片马赛克技术将带有组织细胞的6种切片组成一个反应区，4 ℃保存备用。将待检血清1∶100稀释后与组织细胞孵育30 min，医生在线答疑，后加入荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合30 min，经洗片、封片后荧光显微镜观察结果；ELISA法检测全部血清病毒性肝炎标志物，包括抗HAV IgM、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb及抗HCV抗体和抗HEV IgM/IgG等，其中抗HAV IgM试剂盒购于上海华泰生物工程实业有限公司，HBV试剂盒购于上海荣盛生物技术有限公司，抗HCV抗体和抗HEV IgM/IgG购自洛阳华美生物工程有限公司。
　　1.3& 结果判定& 在同一张切片中根据荧光模式特点可同时判定出下列几项自身抗体：ANA、AMA、SMA、LKM和抗心肌抗体（ASA）。血清稀释度ANA&1∶1000、SMA&1∶320、AMA及LKM&1∶100时组织细胞内出现特异性绿色荧光判为阳性，未见荧光反应者为阴性。
　　1.4& 统计学方法& 计数资料用χ2检验。
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<font color="#0-抗线粒体抗体在原发性胆汁性肝硬化患者中的检测及临床研究;;;;
&#12288;&#12288; 目的探讨抗线粒体抗体(AMA)检测在肝病患者中的临床意义。方法对89例各种肝病患者采用欧蒙公司产生的间接免疫荧光法检测抗线粒体抗体。结果(1)原发性胆汁性肝硬化阳性率94.74%(18/19),自身免疫性肝炎阳性率44.44%(4/9),乙型肝炎阳性率23.81%(5/21),丙型肝炎阳性率27.27%(3/11),戊型肝炎阳性率80%(8/10),40例对照组3例阳性;(2)PBC与正常组血清AMA检测比较χ2=42.76:P&0.01有非常显著性差异;AIH与正常对照组比较χ2=8.19,P&0.05有显著性……
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原发性胆汁性肝硬化患者外周血临床免疫指标分析
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抗M2-3E ELISA:一种新型、高效的PBC血清学诊断方法
& 摘 要: 原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种免疫介导的慢性炎症性胆汁性肝病,其病因不明。AMA-M2是PBC患者最为灵敏和最为特异的诊断标志,高达94%的PBC患者显示AMA-M2阳性。AMA-M2抗体的靶抗及OADC,由BCOADC-E2、PDC-E2、OGDC-E2、PDC-E1t和PDC-E3结合蛋白组成。德国欧蒙公司(EUROIMMUN)率先把融合重组蛋白BPO与天然的PDC纯化抗原相混合,开发了新型的抗M2-3E ELISA检测法。该系统与仅采用天然M2抗原包被或仅包被BPO的ELISA检测系统相比,拥有敏感性较高的优点。
关键词:血清; 诊断; 方法; 酶联免疫吸附测定
& 原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一种免疫介导的慢性炎症性胆汁性肝病,病因不明。到目前为止,在PBC患者中发现4种类型的抗线粒体抗体(anti mito-chondrial antibody,AMA),分别为抗M2、M4、M8、M9抗体。其中AMA-M2是PBC患者最为灵敏和最为特异的诊断标志,高达94%的PBC患者显示AMA-M2呈阳性[1],高滴度AMA-M2抗体对于PBC的诊断和预测PBC患者是否会出现肝功能障碍或者胆汁淤积症状意义重大[2-3]。
AMA-M2抗体的靶抗原为线粒体呼吸链上的2-丙酮酸脱氢酶复合物(2-oxo acid dehydrogenase complex,OADC),包括支链2-酮酸脱氢酶E2亚基(branched-chain oxo acid dehydro-genase complex E2 subunit,BCOADC-E2)、丙酮酸脱氢酶E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2 subunit,PDC-E2)、2-酮戊二酸脱氢酶E2亚基(oxoglutarate dehydrogenase com-plex E2 subunit,OGDC-E2)、PDC-E1t亚基和PDC-E3结合蛋白(蛋白X)。在这些酶组分中,大部分(80%~90%)的M2特异性自身抗体是直接针对PDC-E2的,很多商业化的ELISA检测试剂盒也是仅仅基于这个主要靶抗原而设计的[1,4-7]。然而,有4%~13%患者因只表达针对M2复合体中BCOADC-E2和(或)OGDC-E2的自身抗体,在应用一般的常用试剂盒检测时,常常会导致PBC患者的漏诊和误诊[8-10]。近年来也有利用抗原混合或通过杂交技术融合表达MIT3(因为它含有PDC-E2、BCOADC-E2和OGDC-E2 3个线粒体的表位而得名)或BPO(BCOADC、PDC和OGDC),进行了相应的系列技术改进,并证明这些方法对早期检测大部分通常识别抗线粒体抗原的AMA是有用的,但不能检测和针对PDC-E1A和PDC-E1B表位及其他线粒体抗原亚基的自身抗体[11-18]。
为了克服这些限制,国欧蒙公司(EUROIMMUN)率先把融合重组蛋白BPO与天然的PDC纯化抗原相混合,开发了新型的抗M2-3E ELISA检测法。该系统与仅采用天然M2抗原(PDC)包被或仅包被BPO的ELISA检测系统相比,提高了PBC的检测敏感性。
1 抗M2-3E ELISA
1.1 创新点 将融合蛋白BPO(在大肠杆菌E.coli中表达)与天然M2(纯化的猪丙酮酸脱氢酶PDC)相混合包被在微孔板上,采用ELISA法检测抗M2自身抗体。
1.2 技术参数
1.2.1 抗M2-3E ELISA系统的敏感性和特异性 通过对170例PBC患者血清和989例对照样本(598例其他自身免疫性疾病患者血清和400例健康献血者血清)进行AMA-M2抗体检测,发现抗M2-3E抗体ELISA试剂对PBC诊断的敏感性为92.9%,特异性为97.8%。
1.2.2 抗M2-3E抗体ELISA与抗M2抗体ELISA、抗BPO抗体ELISA和IFL AMA(大鼠肾)检测系统敏感性与特异性比较。
1.2.2.1 与抗M2抗体ELISA的比较 用抗M2抗体
ELISA和抗M2-3E抗体ELISA同时检测170例PBC患者血清。抗M2-3E抗体的敏感性为92.9%,明显高于抗M2抗体(79.4%),这两个检测系统针对989例对照样本的特异性分别为97.8%(抗M2-3E抗体)和99.5%(抗M2抗体)。
1.2.2.2 与抗BPO抗体ELISA的比较 同时检测了170例PBC患者血清,抗M2-3E抗体的敏感性为92.9%,高于抗BPO抗体(90.2%)。特异性分别为97.8%(抗M2-3E抗体)和98.8%(抗BPO抗体)。
1.2.2.3 与IFL(基质:大鼠肾)的相关性 针对所检测的170例PBC患者血清的敏感性分别为92.9%(抗M2-3E抗体ELISA)和88.8%(IFL),200例病毒性肝炎和49例自身免疫性肝炎患者血清这两个检测系统的特异性具有可比性(ELISA:97.8%,IFL:97.6%)。
1.3 在中国业界使用情况 张洋等[19]通过采用3种不同AMA-M2 ELISA检测方法同时检测96例PBC患者血清,发现抗M2-3E抗体ELISA的敏感性为96.9%,明显高于抗M2抗体ELISA(81.2%)和抗BPO抗体ELISA(88.5%)。
有学者报道了107例PBC患者中的敏感性和特异性,发现抗M2-3E抗体ELISA的敏感性为92.5%,明显高于抗M2抗体ELISA(72.9.2%)和抗BPO抗体ELISA(87.9%)。
综上所述,抗M2-3E抗体ELISA是一种新颖、高效的原发性胆汁性肝硬化血清学诊断试剂,为原发性胆汁性肝硬化的诊断提供了简便、准确且有效的检查手段,值得临床推广和应用。
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