RTE细胞,大鼠气管上皮细胞价格
产品名称:RTE细胞,大鼠气管上皮细胞价格现货
用途:科研
特点:活性好、存活率高、实验成果特征明显
来源:人组织、小鼠组织、大鼠组织、兔组织等动物组织等
价格:询价021-60513568或15800667461
保存与运输:复苏特快专递
培养方法收到“RTE细胞,大鼠气管上皮细胞价格 ”优质产品后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。
如果细胞已长满(达80-90%),即可进行传代,具体步骤如下:
1)弃去培养液,用PBS洗1-2次。
2)向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,再倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取胰蛋白酶,加含有6ml含10%的血清的培养液,轻轻吹打细胞。
3)加入等量的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新别的地方培养。
4)传代比例:1:2-1:3
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对于 【RTE细胞,大鼠气管上皮细胞价格】培养,我们会遇到方方面面的问题。我们总结了细胞培养常见问题分析。
1)冷冻管应如何解冻?
取出冷冻管后, 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。
2)细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO?
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中, 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应,好医师网, 造成细胞无法存活。
【初代培养原理】
将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂
仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)
材料:动物组织块
试剂:1640培养基(含20%小牛血清),0.25%胰酶,Hank′s液,碘酒
【初代消化培养法】
(1)准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
(2)布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
(3)处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
(4)剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
(5)消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
(6)分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
(7)计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO23调整。
(8)培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。
【初代组织块培养法】
(1)剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
(2)摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以0.5cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。
(3)轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置36.5℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),医生在线答疑,使小块微干涸。
培养从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
【传代培养法原理】
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时
也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
【材料和试剂】
1)细胞:贴壁细胞株
2)试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)
3)仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
【操作步骤】
1)吸除培养瓶内旧培养液。
2)向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。
3)置温箱中2~5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。
4)吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。
5)用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6)计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。
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